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上海勁馬與您分享關于ELISAS實驗血清的制備有哪些
① ELISA試劑盒所需的抗原量 一般1-10mg/mL。
②免疫途徑 抗原的注射方法有皮下注射、肌肉注射、腹膜內注射、靜脈注射和淋巴結注射等。其中以靜脈注射zui為簡單方便,不需要佐劑乳化,產生抗體的高峰值出現(xiàn)較早,一般在一周左右,注射后一周即可采血測試效價。免疫過程中應注意:a.佐劑只能現(xiàn)配現(xiàn)用:b.采血時間不宜拖得太長。因為免疫時間越長,產生交叉反應的抗體也越多。
③ELISA試劑盒抗血清的分離 當?shù)玫綕M意的效價時,即可進行取血。將收集到的血液成斜面放置在37℃、溫箱中2h。然后置于4℃冰箱過一夜。次日用滴管吸取抗血清,用離心法(2000-3000r/min,20min)去掉沉淀。然后測定效價、鑒定純度。純度用紫外分光光度計或Folin氏比色法進行測定??寡灞4嬗?25℃低溫處。
④抗血清的效價測定 測定的方法一般有兩種,即試管沉淀法和免疫雙擴散法。對于免疫酶技術使用的抗血清,必須具有一定的效價,試管沉淀法應不低于1:2,免疫雙擴散法不低于1:2,且要求單價抗血清。
ELISA試劑盒捕食者的收集和準備 主要方法有3個:
①將胃內含物擠在質量好的濾紙上,但蛋白質易與纖維素結合,若保存過久則難以洗脫:
②將待檢查的捕食封閉在明膠膠囊內,并加干燥劑,以使蟲體與膠囊分離:
③盡可能快地將采集到的捕食者儲存于低溫下(如-40℃)。前兩種方法適于郵寄和長途運輸,后一種方法能保存較長的時間。所有的方法都需保持干燥。對較大的捕食者,可將消化道分離,像蟻、蝸牛以及蜘蛛等小型動物則整個蟲體。
(4)酶聯(lián)抗體的制備 按戊二醛簡易法進行。