于2016年4月12日下午15時，酶聯(lián)免疫學(xué)第三方檢測中心(上海恒遠生物)首屆細胞培養(yǎng)在線問答活動于本成功開放，不少用戶熱情參與，向我司技術(shù)提出問題。當(dāng)時下午17時整，時長兩個小時的網(wǎng)絡(luò)在線技術(shù)問答活動已截止。下面是常見問答內(nèi)容公布，希望對您的實驗帶來幫助：
1.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？ 
  不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細胞培養(yǎng)基， 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基， 細胞大都無法立即適應(yīng)， 造成細胞無法存活。 

2.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類？ 
  不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清， 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。 

3.如何選用特殊細胞系培養(yǎng)基？ 
  培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之，MEM做粘附細胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細胞培養(yǎng)是一個好的開始。 

4.何時須更換培養(yǎng)基？ 
  視細胞生長密度而定，或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時間，按時更換培養(yǎng)基即可。 

5.細胞培養(yǎng)基偶然被凍，可否繼續(xù)使用？ 
  如果細胞培養(yǎng)基偶然被凍，您應(yīng)該熔化培養(yǎng)基并觀察是否有沉淀產(chǎn)生。如果沒有沉淀產(chǎn)生，培養(yǎng)基可以正常使用，如果出現(xiàn)沉淀，只能丟棄這些培養(yǎng)基。 

6.無血清培養(yǎng)與有血清培養(yǎng)使用的抗生素量一樣嗎？ 
  當(dāng)在無血清培養(yǎng)基中添加抗生素時，降低至少在有血清培養(yǎng)基中所使用濃度的50%。血清蛋白會結(jié)合和滅活一些抗生素。在無血清培養(yǎng)條件下，抗生素不被滅活，可能對于細胞達到毒性水平。 

7.培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎？ 
  一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。 

8.培養(yǎng)基及其它添加物和試劑可反復(fù)凍融嗎？ 
  大部分添加物和試劑zui多可以凍融3次，如果次數(shù)更多都會在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，將會影響它的性能。 

9.為什么要在溶解的一周內(nèi)使用貯存在4℃冰箱中的液體胰蛋白酶溶液？
  胰蛋白酶在4℃就可能開始降解，如果在室溫下放置超過30分鐘，就會變得不穩(wěn)定

10.DMSO之等級和無菌過濾之方式為何？ 
   冷凍保存使用之DMSO 等級， 必須為Tissue culture grade之DMSO (如Sigma D2650)， 其本身即為無菌狀況， *次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中， 保存于4°C， 避免反復(fù)冷凍解凍造成DMSO 之裂解而釋出有害物質(zhì)， 并可減少污染之機會。若要過濾DMSO， 則須使用耐DMSO 之Nylon 材質(zhì)濾膜。 

11.冷凍保存細胞之方法？ 
   方法一：冷凍管置于4℃ 30~60分鐘→(-20℃ 30分鐘)→-80℃ 16~18小時(或隔夜)→液氮槽vaporphase長期儲存。 
   方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽vapor phase長期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。 

12.支原體污染會對細胞培養(yǎng)有何影響？ 
   支原體污染幾乎可影響所有細胞之生長參數(shù)， 代謝及研究之任一數(shù)據(jù)。故進行實驗前，必須確認細胞為mycoplasma-free，實驗結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義。 

13.偵測出細胞株有支原體污染時，該如何處理？ 
   直接滅菌后丟棄，以避免污染其它細胞株。 

14.為何培養(yǎng)基保存于4℃冰箱中，顏色會偏暗紅色，且pH值會越來越偏堿性？ 
   培養(yǎng)基保存于4℃冰箱中，培養(yǎng)基內(nèi)之CO2會逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來越偏堿性。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑(通常為phenol red)的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果，將造成細胞生長停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時，可以通入無菌過濾之CO2，以調(diào)整pH值。

15.細胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何？ 
   動物細胞冷凍保存時zui常使用的冷凍培養(yǎng)基是含5-10% DMSO(dimethyl sulfoxide)和90-95%原來細胞生長用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之。注意：由于DMSO稀釋時會放出大量熱能， 故不可將DMSO直接加入細胞液中， 必須使用前先行配制完成。 

16.培養(yǎng)細胞時應(yīng)使用5%或10%CO2？或根本沒有影響？ 
   一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細胞培養(yǎng)時應(yīng)使用的CO2濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時，細胞培養(yǎng)時應(yīng)使用10%CO2；當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時，則應(yīng)使用5%CO2培養(yǎng)細胞。 
  
17.培養(yǎng)基中是否須添加抗生素？ 
   除于特殊篩選系統(tǒng)中外，一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下， 培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素。 

    以上這些有幫助到您嗎？不久后，我司會陸續(xù)推出培養(yǎng)基、血清、ELISA試劑盒的在線問答活動，期待大家熱情參與。