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ELISA實(shí)驗(yàn)的過程常見問題

更新時(shí)間:2014-06-27 點(diǎn)擊量:779

        大家在做ELISA實(shí)驗(yàn)的過程中,難免會(huì)遇到各種不同的問題,比如標(biāo)準(zhǔn)曲線不好,試劑盒的回收率,假陰性,假陽性,實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性不好等等?,F(xiàn)在上海勁馬生物科技有限公司就來一一解答用戶們?cè)趯?shí)驗(yàn)過程中遇到的各種疑問!
曲線問題: 

 

 

1.OD值不正常

試劑盒未回溫,試劑盒回溫到25℃

溫度控制不好,控制正確溫度

孵育時(shí)間不準(zhǔn)確,控制孵育時(shí)間

洗滌時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過長(zhǎng)、洗滌次數(shù)增 加,洗滌4-5次,每孔250ul,然后拍干

陽光直射,對(duì)著風(fēng)直接吹,避風(fēng)避

酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)錯(cuò)誤,酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)450nm

抗體的稀釋錯(cuò)誤,正確的稀釋抗體

水質(zhì)問題,用娃哈哈礦泉水代替

2.白   板

洗滌液配制錯(cuò)誤,正確的配制洗滌液

少加液體(錯(cuò)加液體),正確的步驟加液體

3.無 梯 度

標(biāo)準(zhǔn)品也污染,換標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)板

 

OD值不正常,控制溫度時(shí)間在做一次

 

人為點(diǎn)板,不要點(diǎn)板

4.線 性 不 好

OD值不正常,控制溫度時(shí)間在做一次

回收率

 

1.空白管陽性高

樣本本身就是陽性樣本,換陰性樣本做回收率

空白管在實(shí)驗(yàn)中被污染,實(shí)驗(yàn)中防止交叉污染

水質(zhì)原因用,娃哈哈礦泉水代替

2.偏  高

添加量不準(zhǔn)確,的添加量

 

添加濃度不適合,添加合適的濃度

 

取液吹干量多,準(zhǔn)確的取液吹干

 

取到其它相層液體,取需用相吹干

 

復(fù)溶液未稀釋或加入量少,正確的稀釋復(fù)溶液

 

3.偏  低

添加量不準(zhǔn)確,的添加量

添加濃度不適合,添加合適的濃度

取液吹干量少,準(zhǔn)確的取液吹干

復(fù)溶液稀釋錯(cuò)誤或加入量多,正確的稀釋復(fù)溶液

假陰、陽性

 

1,水質(zhì)原因:點(diǎn)復(fù)溶液驗(yàn)證,用娃哈哈礦泉水代替

 

2,實(shí)驗(yàn)操作原因

吸取到其它相吹干,準(zhǔn)確的取液吹干

離心不*,延長(zhǎng)離心時(shí)間

樣本的污染,更換樣本

乳化未處理*,溫?。?0℃)處理乳化現(xiàn)象

 

3,儀器試劑原因

離心管未清洗干凈,正確的洗滌器具

有機(jī)溶劑的影響,做試劑空白看影響結(jié)果

4,衍生化試劑原因(長(zhǎng)時(shí)間衍生化試劑變質(zhì)),更換衍生化試劑

5,與曲線好壞相關(guān),,保證曲線的正常

      
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