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免疫組化實驗成功的關鍵

更新時間:2015-06-18 點擊量:2064

*免疫組化實驗成功的關鍵是抗體,如果抗體不好,整個實驗就基本上不會成功。如何選擇抗體成為免疫組化zui頭疼的問題,因為一旦實驗不成功將浪費我們辛苦收集來的樣本,今天讓上海恒遠與您分享一下如何選擇抗體這個問題!

1、一抗質量是酶免疫組化、免疫熒光和Western blotting等試驗中的zui關鍵因素之一。從免疫組化選擇抗體來說,質量的公司可能是Chemicon、upstate、Abcam、Dako公司等;從Western blotting選擇抗體來說,信價比的可能是Abcam公司,一般都1ml,價格在2000元每株左右。而一抗訂購中選擇原則有1)選擇單克隆還是多克隆抗體,前者特異性好,而后者靈敏度高;2)選擇何種種屬來源?一般兔來源的多是多克?。欢∈髞碓吹亩嗍菃慰寺?,但也有另外。這也決定了你的二抗類型。3)檢測何種種屬的抗原,即species reactivity:Hu-human, Ms-mouse, Rat, Goat, Rb-rabbit, Shp-sheep等;這個很重要。4)抗體類型:IgG1/IgG2a/IgM?一旦一抗選為IgM,那么你二抗就必須是抗IgM;5)應用范圍:WB, IP, IF, IHC(P), ELISA?一抗說明書中注明抗體可以應用于western blotting、免疫沉淀、免疫熒光、免疫組化(石蠟切片)、ELISA等等,這根據(jù)你實驗目的抉擇。6)抗體公司的選擇,主要根據(jù)信價比的高低以及高質量文獻數(shù)據(jù)支持。

2、二抗選擇:一般有生物素標記、HRP標記和熒光素標記的二抗等多種。一抗種屬選擇好后,那么二抗只能是某種抗一抗種屬來源的抗體,如果是酶免疫組化,則可以選擇Bio-或HRP-標記,可以買不同公司單獨的抗體,也可購買二抗染色試劑盒,包括二抗、SP等;而免疫熒光則可以選擇熒光素標記的二抗,可以買美國Abcam公司等熒光素二抗,質量還不錯。zui后,建議大家可能還是在排除方法、切片中抗原有無等前提下來客觀、正確評價各種抗體的質量。

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