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動(dòng)物血清論,恒遠(yuǎn)生物記詳細(xì)知識(shí)資料

更新時(shí)間:2014-04-08 點(diǎn)擊量:1695

    近這些天中,很多地區(qū)都是時(shí)時(shí)雨連天的,節(jié)后回來這新的一天中,上海恒遠(yuǎn)來跟朋友們講動(dòng)物血清論,恒遠(yuǎn)生物記詳細(xì)知識(shí)資料。我們從其中的常規(guī)啊,處理啊等多方面來說明,下面我們就來看一看吧。
    我們知道的,血清通常作為補(bǔ)充成分添加在基礎(chǔ)培養(yǎng)基內(nèi)使用,能提供各種大分子蛋白,小分子量營養(yǎng),水溶性成分的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,和其它一些細(xì)胞在體外所必需的成分。可以結(jié)合或中和一些生長(zhǎng)因子中的有毒成分,并提供培養(yǎng)基的緩沖能力。細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)血清的添加依賴于基礎(chǔ)培養(yǎng)基的化學(xué)組成,培養(yǎng)細(xì)胞的類型,及所用的培養(yǎng)系統(tǒng)。
    采集:胎牛血清采用妊娠3-9個(gè)月的小牛胎兒心臟穿刺的方法采集。馬血清采自經(jīng)細(xì)心飼養(yǎng)的供體畜群;新生牛血清采自出生10至14天的小牛。全部血清均按工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)采集。
    處理:(全部血清)收集的血液均在冷藏條件下處理。血清和血塊分離后立即將血清合并并冷凍。只有符合我們的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的血清才被接受作進(jìn)一步處理。
    熱滅活血清:熱滅活是在56℃水浴中嚴(yán)格控溫30分鐘。
    透析血清:用10,000截留分子量的透析膜在0.15M的NaCl中進(jìn)行透析,直到葡萄糖水平低于5mg/dl(用鄰甲苯胺測(cè)試法檢驗(yàn))。(伽馬射線照射血清)可按客戶要求對(duì)血清進(jìn)行伽馬射線照射。通過伽馬射線照射以滅活各種動(dòng)物血清中的病毒和支原體的方法已經(jīng)得到證實(shí)。研究證實(shí)照射劑量在30-45kGy為宜。血清在此照射后物理化學(xué)特性和細(xì)胞培養(yǎng)表現(xiàn)沒有變化。
    裝瓶:粗血清須通過一系列的過濾才成為成品。zui后的過濾步驟包括使用0.2微米和0.1微米的無菌過濾。胎牛血清須通過三
次0.1微米過濾,其他血清須通過0.2微米過濾。
    質(zhì)量控制:我們采取以下方法對(duì)每一批次的產(chǎn)品選取一定數(shù)量的樣品進(jìn)行質(zhì)量控制分析。
檢測(cè):
1、化學(xué)檢測(cè):使用低溫凝固點(diǎn)的方法檢測(cè)滲透壓,以保證符合產(chǎn)品規(guī)范。我們每天使用國家標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)研究所標(biāo)定的標(biāo)準(zhǔn)溶液
對(duì)我們的滲透壓檢測(cè)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)。同樣每天使用國家標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)研究所標(biāo)定的標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)pH計(jì)進(jìn)行校準(zhǔn)。使用電泳圖譜鑒定血清的整體性質(zhì)。樣品被轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素基質(zhì)中,并在緩沖體系內(nèi)遷移。條帶經(jīng)染色、清潔、干燥后用密度儀進(jìn)行掃描,以檢測(cè)白蛋白和球蛋白組分的相對(duì)濃度。為證實(shí)是否在適當(dāng)?shù)臈l件下進(jìn)行采血和處理, 使用修飾的Fleming方法對(duì)血紅蛋白進(jìn)行分光光度檢測(cè)。
2、微生物學(xué)檢測(cè):所有血清使用Barile&Kern的大體積方法檢測(cè)支原體。在推薦方法的檢測(cè)范圍內(nèi)檢測(cè)結(jié)果是準(zhǔn)確的。樣品至
少應(yīng)該在肉湯中合并培養(yǎng)3個(gè)星期,同時(shí)要在瓊脂平板上進(jìn)行不少于4次傳代培養(yǎng)。在有氧和厭氧(95%氮,5%C O 2)條件下,平板在36±2℃下孵育。在檢測(cè)過程中,每周對(duì)瓊脂平板進(jìn)行一次微生物生長(zhǎng)情況檢驗(yàn)。使用Dienes染色法對(duì)懷疑被污染的瓊脂平板進(jìn)行支原體菌落的檢測(cè)。然后,對(duì)平板進(jìn)行再次鏡檢。對(duì)孵育肉湯瓶要定期進(jìn)行濁度和pH值變動(dòng)的檢測(cè)。在推薦方法檢測(cè)范圍內(nèi),所有血清也要使用Hoechst熒光DNA染色法進(jìn)行不可在肉湯中培養(yǎng)的支原體檢測(cè)。
3、效能檢測(cè):對(duì)每一批次的胎牛血清,我們都進(jìn)行下述培養(yǎng)效能檢測(cè)。選擇血清zui重要的標(biāo)準(zhǔn)是其支持特殊細(xì)胞的生長(zhǎng)能力。因此,除了保證血清通過嚴(yán)格的品質(zhì)控制,我們也同時(shí)在實(shí)驗(yàn)室條件下對(duì)血清的三個(gè)重要的培養(yǎng)效能進(jìn)行檢測(cè):克隆效率、貼壁效果和二倍體成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)促進(jìn)。克隆效率分析:克隆效率實(shí)驗(yàn)分析每一批胎牛血清促進(jìn)小鼠骨髓瘤細(xì)胞及其衍生的雜交瘤細(xì)胞的克隆和生長(zhǎng)能力。
血清的使用與儲(chǔ)存:
    正確的使用及保存血清,才能使血清發(fā)揮應(yīng)有的作用。
1、儲(chǔ)存條件:血清一般儲(chǔ)存于-20℃,同時(shí)應(yīng)避免反復(fù)凍融。購買大包裝的血清后,首先要滅活處理,然后分裝成小包裝,儲(chǔ)存于-20℃,使用前融化。融化時(shí)現(xiàn)置于4℃。融化后的血清在4℃不宜長(zhǎng)時(shí)間存放,應(yīng)盡快使用。
2、使用濃度:自從有了合成培養(yǎng)基,血清就是作為一種添加成分與合成培養(yǎng)基混合使用,使用濃度一般為5-20%,zui常用是10%。過多血清容易使培養(yǎng)中的細(xì)胞發(fā)生變化,特別是一些二倍體的無限細(xì)胞系,迅速生長(zhǎng)之后容易發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。
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