人氧化型谷胱甘肽試劑盒操作原理

本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍：                                                                                                                    96T
5µg/L -160µg/L  
 
使用目的：
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中氧化型谷胱甘肽（GSSG）含量。

實驗原理：

 人氧化型谷胱甘肽試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人氧化型谷胱甘肽（GSSG）水平。用純化的人氧化型谷胱甘肽（GSSG）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入氧化型谷胱甘肽（GSSG），再與HRP標記的氧化型谷胱甘肽（GSSG）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的氧化型谷胱甘肽（GSSG）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人氧化型谷胱甘肽（GSSG）含量。

人氧化型谷胱甘肽試劑盒操作步驟
1.  標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
160µg/L  5 號標準品  150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液
80µg/L  4 號標準品  150µl的5 號標準品加入150µl標準品稀釋液
40µg/L  3 號標準品  150µl的4 號標準品加入150µl標準品稀釋液
20µg/L  2 號標準品  150µl的3 號標準品加入150µl標準品稀釋液
10µg/L  1 號標準品  150µl的2 號標準品加入150µl標準品稀釋液  
2.  加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同） 、標準孔、待測樣品孔。 在酶標包被板上標準品準確加樣50µl， 待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，
然后再加待測樣品10µl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。       
4.  配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復 5次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶標試劑50µl，空白孔除外。   
7.  溫育：操作同3。
8.  洗滌：操作同5。
9.  顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10.  終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色） 。
11.  測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） 。 測定應在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進行。