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如何做好ELISA實(shí)驗(yàn)?

更新時(shí)間:2021-01-29 點(diǎn)擊量:982
在生產(chǎn)過(guò)程中,不同批次的試劑的質(zhì)量,保證*一致非常困難,ELISA試劑盒甚至通過(guò)批檢驗(yàn)項(xiàng)目和結(jié)果也不同,因此必須選擇和訂購(gòu)試劑長(zhǎng)批次,并確保小鼠ELISA試劑盒保存條件。嚴(yán)格執(zhí)行本標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號(hào)變化與質(zhì)量控制系統(tǒng)和復(fù)雜的過(guò)程,重新評(píng)價(jià)試劑重新建立,并能保證結(jié)果的穩(wěn)定性;有效期短,使用率低的試劑,應(yīng)小包裝,包裝,可每次都是采取,以避免重復(fù)凍融破壞試劑引起的。
 
在Elisa試劑盒的使用過(guò)程中常見(jiàn)問(wèn)題有很多如, 加樣器不確;尤其10ul以下的加樣器,對(duì)結(jié)果影響很大;  保溫設(shè)備不良;  洗滌用水不規(guī)范。
如何解決這些問(wèn)題呢:
1在使用過(guò)程校正加樣器;10ul以下加樣器采用進(jìn)口產(chǎn)品(芬蘭、法國(guó)等);
2 仔細(xì)校正溫度到37℃,水浴箱為佳;  
3 必須使用去離子水或蒸餾水,不得用自來(lái)水、礦泉水等; 
4 認(rèn)真閱讀使用說(shuō)明書(shū)。  
 
樣品加樣:  
1 加樣不準(zhǔn)確;  2 沒(méi)有混勻。  加樣時(shí)一定要仔細(xì)。加樣后,再檢查,以防漏加、錯(cuò)加。  
2 加樣后,反復(fù)抽吸3次混勻,防止血清聚集孔底,導(dǎo)致非特異性吸附。  洗滌  洗滌不*  ①每次注水洗滌,應(yīng)靜止30秒鐘;②選用吸水紙作為襯墊,每次洗滌后扣干孔內(nèi)水分; 
3 可選用塑料洗滌瓶。  加酶反應(yīng) 漏加 滴加后,認(rèn)真檢查各孔  結(jié)果判斷  ①包括陰性對(duì)照孔在內(nèi),各孔顯色普遍偏深;②包括陽(yáng)性對(duì)照在內(nèi),各孔均無(wú)顯色;③陽(yáng)性對(duì)照不顯色,而其它樣本顯色正常; 
4 有些標(biāo)本顯色不深,判斷陽(yáng)性困難。  ①可能是洗滌不充分;加樣過(guò)量;溫育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)溫度過(guò)高;按說(shuō)明書(shū)重新操作。如無(wú)改善, 可與生產(chǎn)廠家聯(lián)系;②可能是漏加樣本或酶液;溫育時(shí)間過(guò)短溫度過(guò)低;試劑保存不當(dāng)活性下降;按說(shuō)明書(shū)重新 操作。如無(wú)改善,可與生產(chǎn)廠家聯(lián)系;③陽(yáng)性對(duì)照漏加、錯(cuò)加或失效。重新操作。如無(wú)改善,可與廠家聯(lián)系,索要對(duì)照品; ④重新操作。使用酶標(biāo)儀,測(cè)定光吸收度,按P/N值標(biāo)準(zhǔn)判斷。  ELISA試劑盒保存 保存不規(guī)范 一定要在2-8℃存放。不得過(guò)高,也不得凍存(凍存后,酶液將失效)。  對(duì)照品 對(duì)照品為凍干品 按對(duì)照管標(biāo)示,加入相應(yīng)體積的去離子水或蒸餾水復(fù)溶,充分溶解混勻??砂凑f(shuō)明書(shū)使用。
 
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