昨天下午，我公司收到一位客戶對實驗的咨詢留言。這位客戶說道：“初次做間接ELISA，做了幾次結果都沒有顯色，原因在哪里呢”
   

    收到留言后，吳為客戶安排技術去。針對問題描述，上海恒遠技術員分析出為何間接ELISA沒有顯色，可能原因有這幾個方面：

1.包被原：包括你的包被液有無問題，有沒有配錯。包被原一般加100微升，37度2小時；

2.封閉：封閉液用的是否適合？你說做了幾次都沒顯色，空白孔也不顯嗎？如果空白也無顏色，那封閉就沒有問題。一般封閉是200微升每孔，也可以滿孔封閉

3.一抗：檢查你的一抗是否失效。是否是在37度反應

4.二抗：底物，底物緩沖液……這些都要好好檢查！

5.洗滌：用PBST洗滌，包被和封閉時洗板3次；一抗二抗洗滌5次，每次間隔3分鐘。
                     

    手工和機器洗滌沒什么不同，就是省力一些。洗5次不會有負影響，在一抗和二抗洗滌過程中，恰恰需要多洗幾次，這樣有助于減少非特異性吸附。

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